新冠血清檢測(cè)假陽(yáng)性！虛驚一場(chǎng)的快速反應(yīng)

“聽(tīng)說(shuō)你們醫(yī)院查出2例新型冠狀病毒抗體IgM陽(yáng)性？”

這是日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院職工今天接到最多的關(guān)心電話！

確實(shí)?。?/span>

2020年10月14日下午，日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院檢驗(yàn)中心在對(duì)核酸檢測(cè)受檢者進(jìn)行新型冠狀病毒核酸檢測(cè)時(shí)檢測(cè)到兩份血清樣本新型冠狀病毒抗體IgM陽(yáng)性。

畢竟在這個(gè)新冠肺炎疫情反復(fù)的重要時(shí)期，任何關(guān)于疫情防控的信息都牽動(dòng)著每一位市民朋友的心！

面對(duì)疫情，日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院沒(méi)有絲毫懈怠，嚴(yán)格操作規(guī)范，檢驗(yàn)中心立即進(jìn)行復(fù)檢、核對(duì)，并同時(shí)查看儀器狀態(tài)，試劑狀態(tài)。確認(rèn)在控、復(fù)檢結(jié)果核對(duì)后，立即上報(bào)。

醫(yī)院高度重視，緊急啟動(dòng)疫情防控應(yīng)急預(yù)案工作，院感辦在第一時(shí)間將相關(guān)信息及時(shí)上報(bào)至高新區(qū)管委與市疾控中心，市疾控中心迅速反應(yīng)，通知五蓮縣疾控中心與東港區(qū)疾控中心安排兩位受檢者及時(shí)進(jìn)行復(fù)檢。

經(jīng)當(dāng)?shù)丶部刂行膹?fù)查，兩位受檢者肺部CT無(wú)影像學(xué)改變，血清IgM、IgG、核酸檢測(cè)均呈陰性，判斷兩位受檢者均為“假陽(yáng)性”.

真誠(chéng)感謝廣大市民朋友們的關(guān)心和厚愛(ài)！感謝為此快速反應(yīng)為民送平安的各級(jí)政府相關(guān)部門(mén)！

為什么會(huì)出現(xiàn)“假陽(yáng)性”？

特異IgM和IgG免疫測(cè)定假陽(yáng)性通常有以下兩個(gè)方面的原因，一是試劑盒陽(yáng)性判斷值（Cut-off value）的設(shè)定，一些處于陽(yáng)性判斷值附近的弱陽(yáng)性結(jié)果，很可能是假陽(yáng)性；其二是患者標(biāo)本中存在導(dǎo)致免疫測(cè)定假陽(yáng)性的內(nèi)源性或外源性干擾物質(zhì)。

（一）陽(yáng)性判斷值的設(shè)定

膠體金試紙條檢測(cè)是通過(guò)肉眼觀察顏色有否來(lái)判斷陽(yáng)性和陰性，不存在陽(yáng)性判斷值的問(wèn)題，但會(huì)存在不同檢測(cè)者判斷的差異?；瘜W(xué)發(fā)光免疫試驗(yàn)（CLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）則需要設(shè)定陽(yáng)性判斷值，其較好的做法是通過(guò)測(cè)定大量的陰性人群（可數(shù)千份）和一定數(shù)量（可數(shù)百份）的已知陽(yáng)性人群標(biāo)本，會(huì)得到如圖2的一個(gè)分布，采用接受機(jī)工作特性（Receiver Operating characteristic，ROC）曲線或其他統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的陽(yáng)性判斷值，通常為假陽(yáng)性和假陰性均較低且達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)的測(cè)定信號(hào)如OD值或發(fā)光值。因此，不可避免處于其周邊陽(yáng)性一側(cè)的結(jié)果，會(huì)有一部分弱陽(yáng)性其實(shí)際為假陽(yáng)性。

（二）干擾物質(zhì)

1、內(nèi)源性：內(nèi)源性干擾物質(zhì)一般包括類(lèi)風(fēng)濕因子、嗜異性抗體、補(bǔ)體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig 抗體等。在日常的臨床血清（漿）標(biāo)本中，有相當(dāng)比例的標(biāo)本不同程度的含有上述各種干擾物質(zhì)，從而可能導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的假陽(yáng)性。

（1）類(lèi)風(fēng)濕因子

（Rheumatoid factors，RF）

在類(lèi)風(fēng)濕患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有較高或不同濃度的RF，其通常為IgM型，亦有IgG和IgA型，RF具有與變性IgG產(chǎn)生非特異結(jié)合的特點(diǎn)，因此在免疫測(cè)定中，其可與固相上包被的特異抗體IgG以及隨后加入的標(biāo)記的特異抗體IgG結(jié)合，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。尤其是在捕獲法IgM型特異抗體的測(cè)定中表現(xiàn)最為明顯，因?yàn)榇藭r(shí)固相包被的抗體為抗人μ鏈抗體，IgM型RF的存在可使其大量結(jié)合于固相。

為避免RF的干擾，通?？刹扇∫韵麓胧?）稀釋標(biāo)本。這在判斷急性病原體感染的特異IgM抗體檢測(cè)等尤為有用。因?yàn)榧毙愿腥緯r(shí)，血循環(huán)中特異的IgM抗體滴度通常很高，而RF滴度通常相對(duì)要低很多。因此，在測(cè)定前對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋?zhuān)禺惖腎gM因高滴度仍可檢出，而非特異的RF則會(huì)因?yàn)橄♂屪兂珊艿偷牡味龋瑥亩挥绊憸y(cè)定。2）改變酶標(biāo)抗體。由于RF結(jié)合的是IgG的Fc片段，如果將標(biāo)記抗體的Fc片段酶切去除，僅留下具有特異結(jié)合功能的F(ab’)2部分用于標(biāo)記，則在測(cè)定中即可避免RF的干擾。3）標(biāo)本中RF用變性IgG預(yù)先封閉。將經(jīng)熱變性（63℃，10 min）的動(dòng)物如兔、羊等的IgG加入到標(biāo)本稀釋液中。此外，在測(cè)定特異IgM時(shí)，也可使用抗人IgG去除臨床標(biāo)本中RF和IgG。4）測(cè)定時(shí)，可在標(biāo)本中加入一定濃度的尿素，其可以解離低親合力結(jié)合的RF和IgG，因而可以去除RF的干擾。

（2）嗜異性抗體

（Heterophilicantibodies）

 人類(lèi)血清中可能會(huì)含有抗嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠、馬、羊等）的抗體，即天然嗜異性抗體。有研究表明，天然的嗜異性抗體（IgG）可分為兩類(lèi)，一類(lèi)（85%的假陽(yáng)性由其引起）可結(jié)合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域，但不與兔IgG的Fab區(qū)結(jié)合。另一類(lèi)（15%的假陽(yáng)性由其引起）可結(jié)合于小鼠、馬、牛和兔IgG的FC區(qū)表位，但不與山羊和大鼠IgG的FC區(qū)表位結(jié)合。嗜異性抗體可通過(guò)交聯(lián)固相和標(biāo)記的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。

由嗜異性抗體引起的干擾可通過(guò)下述方法避免：

1）使用特異的兔F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定標(biāo)記抗體。

2）在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig，封閉可能存在的嗜異性抗體。但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。

（3）補(bǔ)體

在固相免疫測(cè)定中，來(lái)自哺乳動(dòng)物的固相特異抗體和標(biāo)記二抗均可以激活人補(bǔ)體系統(tǒng)。因?yàn)槠湓诠滔辔郊敖Y(jié)合過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)， Fc段的補(bǔ)體C1q結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，這樣C1q就成為一個(gè)中介物將二者交聯(lián)起來(lái)，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。由補(bǔ)體引起的干擾可采用56℃30 min加熱可使標(biāo)本中的補(bǔ)體C1q滅活。但實(shí)施前，一定要有實(shí)驗(yàn)證明這種滅活不會(huì)影響特定試劑的檢測(cè)結(jié)果。

（4）因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體

在臨床上，有可能使用鼠源性單克隆抗體進(jìn)行靶向治療，及使用放射性核素標(biāo)記鼠源性單克隆抗體進(jìn)行影像診斷等，均有可能使相應(yīng)患者體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體。這種抗鼠抗體對(duì)使用鼠源性單克隆抗體的免疫測(cè)定，可產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。

由抗鼠抗體引起的干擾可通過(guò)下述方法避免：

1）使用特異的抗體F(ab’)2片段作為固相或測(cè)定酶標(biāo)抗體。

2）在標(biāo)本或標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的鼠Ig，封閉可能存在的抗鼠抗體。

（5）溶菌酶

溶菌酶可與等電點(diǎn)較低的蛋白有強(qiáng)的結(jié)合能力。免疫球蛋白等電點(diǎn)約為5，因此，在免疫測(cè)定中，溶菌酶可在包被的IgG和標(biāo)記的IgG間形成橋接，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性。Cu2+離子和卵白蛋白可有效地封閉溶菌酶，防止其聯(lián)接IgG。

2、外源性：外源性干擾物質(zhì)包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全等。

（1）標(biāo)本溶血

要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白的血紅素基團(tuán)有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此，在以辣根過(guò)氧化物酶（HRP）為標(biāo)記酶的ELISA和CLIA中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其在溫育過(guò)程中會(huì)吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色或發(fā)光，導(dǎo)致假陽(yáng)性。

（2）標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

標(biāo)本在2~8℃下保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，IgG可聚合成多聚體，在間接法免疫測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、甚至造成假陽(yáng)性。

如何查詢您的核酸檢測(cè)報(bào)告？

1.關(guān)注“日照心臟病醫(yī)院”公眾號(hào)。點(diǎn)擊下方“掌上醫(yī)院”——就診服務(wù)——在線綁卡——檢驗(yàn)報(bào)告即可獲取。

2.持就診卡在自助機(jī)上領(lǐng)取。

  醫(yī)院自助機(jī)地址：門(mén)診樓二樓東側(cè)檢驗(yàn)中心旁邊。

3.通過(guò)支付寶中的健康通行碼下方的‘核酸檢測(cè)信息查詢’進(jìn)行查詢。具體發(fā)布時(shí)間以當(dāng)?shù)貦C(jī)構(gòu)的發(fā)布時(shí)間為準(zhǔn)。

疫情就是命令，

防控就是責(zé)任！

日照心臟病醫(yī)院/青島大學(xué)附屬日照醫(yī)院

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